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重組胰蛋白酶的選型指南
2024/08/16

重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶。它是胰蛋白酶的一種形式,是在實(shí)驗室中合成的,而不是從動(dòng)物來(lái)源(例如豬或牛的胰腺)中提取的。冀百康生物——重組胰蛋白酶,在整個(gè)生產(chǎn)流程中,嚴格避免了使用任何動(dòng)物源性原材料,解決了傳統使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來(lái)病毒污染的風(fēng)險,確保了該重組胰蛋白酶產(chǎn)品的安全性、高純度及超高比活等特性。


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*動(dòng)物源與非動(dòng)物源胰蛋白酶的對比


重組胰蛋白酶具有許多潛在用途,包括應用于在醫藥開(kāi)發(fā)、用作研究工具以及生物技術(shù)應用,例如蛋白類(lèi)藥物的生產(chǎn)、細胞消化、疫苗生產(chǎn)以及用于細胞分析的組織樣本的制備等,總體而言,重組胰蛋白酶在生物制藥和科研領(lǐng)域是不可或缺的關(guān)鍵酶。


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*酶


為滿(mǎn)足下游企業(yè)在生物藥以及科研領(lǐng)域的不同應用需求,冀百康生物提供出四款級別的重組胰蛋白酶可供選擇,分為重組熱穩定胰蛋白酶、重組胰蛋白酶(細胞培養級)、重組胰蛋白酶(藥典級)、重組胰蛋白酶(1:250)。


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*冀百康重組胰蛋白酶


*具體產(chǎn)品信息可聯(lián)系業(yè)務(wù)人員。



選型指南


面對多種多樣的重組胰蛋白酶,下游如何選購才更精準?請參考冀百康生物為您提供的詳盡選型指南。



01 應用于細胞消化,疫苗生產(chǎn)


重組胰蛋白酶(細胞培養級)


重組胰蛋白酶(細胞培養級)在疫苗生產(chǎn)的環(huán)節中作為細胞消化的工具介入,尤其是貼壁依賴(lài)型動(dòng)物細胞的消化。在細胞培養的過(guò)程中,使用重組胰蛋白酶(細胞培養級)對貼壁細胞進(jìn)行處理,能夠快速水解細胞間的沾粘蛋白,釋放出單個(gè)獨立細胞。高純度的細胞培養級無(wú)雜蛋白/雜酶等,可以減少對細胞的非特異性影響,提高消化過(guò)程的特異性和溫和性,保持細胞的完整性和細胞活性。同時(shí),細胞培養級具有超高的比活性,能提升消化效率,更快速地處理細胞樣本。



* 胰蛋白酶消化前后對比

(來(lái)源:分析測試百科網(wǎng)《細胞消化的小技巧》)


不含凍干保護劑,高純度 (SDS-PAGE) ≥95%,蛋白含量≥90%;

更高比活性,通?!?500USP units/mg pro.,每批次不同,詳見(jiàn)COA



02 應用于蛋白質(zhì)分析與純化


重組胰蛋白酶(藥典級)


重組胰蛋白酶(藥典級)符合美國藥典USP42和中國藥典2020版中重組胰蛋白酶相關(guān)標準,更適合常規的蛋白質(zhì)分析與純化。藥典級純度≥95%,可以精準快速地將大分子的蛋白質(zhì)的切割成較小的片段或肽鏈,避免雜質(zhì)或其他蛋白質(zhì)影響,提高蛋白質(zhì)的純度。另外,藥典級超高比活的優(yōu)勢,可在較短的時(shí)間內實(shí)現完全酶解,減少樣品的周轉時(shí)間,加快蛋白質(zhì)分析與純化過(guò)程;減少了非特異性切割和酶自身降解的可能性,從而保證了蛋白類(lèi)藥物的質(zhì)量和均一性。


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*蛋白質(zhì)全譜分析示意圖 

(來(lái)源:武漢國家級人類(lèi)遺傳學(xué)資源庫)


● 含凍干保護劑,高純度≥95%,蛋白含量>50%;

● 更高比活性,通?!?000USP units/mg pro.,每批次不同,詳見(jiàn)COA



03 應用于生物藥物生產(chǎn),如胰島素


重組熱穩定胰蛋白酶


重組熱穩定胰蛋白酶因其在高溫條件下依舊維持活性的特性,可完美規避在使用重組胰蛋白酶過(guò)程中反復凍融而造成的損耗。本品不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑,具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。與重組豬胰蛋白酶等不同,該重組熱穩定胰蛋白酶不易自切,配制為細胞消化液后可在2-8℃穩定存放,在胰島素的生產(chǎn)過(guò)程中,重組熱穩定胰蛋白酶常用于胰島素前體蛋白的酶切轉換步驟,將胰島素前體蛋白轉化為活性胰島素。重組熱穩定胰蛋白酶的高熱穩定性和高比活性有助于在溫和的條件下進(jìn)行高效酶切,減少副產(chǎn)物的生成。


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*人胰島素、甘精胰島素和谷賴(lài)胰島素的前-胰島素原的主要胰蛋白酶切割位點(diǎn)圖。

(來(lái)源:冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應用[J]. 中國藥學(xué)(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)


高純度≥95%,蛋白含量>30%

● 不易自切,穩定性較高

更高比活性,通?!?500USP units/mg pro.,每批次不同,詳見(jiàn)COA



04 應用于疫苗生產(chǎn)中初生組織解離中的細胞解離


重組胰蛋白酶(1:250)


重組胰蛋白酶(1:250)具有良好的消化性,可以有效地破壞細胞粘附和從組織中解放細胞,常應用于疫苗生產(chǎn)中初生組織解離中的細胞解離。1:250中含有EDTA,能抑制金屬依賴(lài)性酶,促進(jìn)細胞間連接的破壞,加快組織細胞剝離。


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*動(dòng)物細胞培養過(guò)程

(來(lái)源:生物器材網(wǎng)《哺乳動(dòng)物細胞培養過(guò)程&培養條件》)



# 應用案例 




推薦使用方法


重組胰蛋白酶(細胞培養級)

● 溶液配制:重組胰蛋白酶室溫下融化,取適量胰蛋白酶,加入HBSS平衡液(或其他適宜細胞消化的緩沖液,如需要加入EDTA其終濃度推薦 0-1mM,最好不超過(guò)2mM),推薦一般使用的胰蛋白酶濃度約為 0.1-0.3mg/ml(濃度根據不同細胞進(jìn)行調整),輕柔混勻;該步驟可在室溫環(huán)境操作;

● 使用0.22μm濾膜對上述胰蛋白酶溶液過(guò)濾并轉移至無(wú)菌容器中;該步驟可在室溫環(huán)境操作;

● 過(guò)濾后的胰蛋白酶溶液應在當天按照要求直接使用(例如加入1ml至T25瓶,37℃消化細胞)


重組胰蛋白酶(藥典級)

● 蛋白質(zhì)的準備——將蛋白質(zhì)溶解在25mM Tris-HCl,pH8.0的溶液中。

● 酶液準備——稱(chēng)取所需的酶粉,用10mM HCl 溶解,使酶液濃度為1-10mg/ml。

● 反應條件——酶量:目的蛋白(質(zhì)量比)=1:50-1:1000,最適pH為7.0~9.0


重組熱穩定胰蛋白酶

● 蛋白酶切

1)將蛋白質(zhì)溶解在25mM Tris-HCl(pH7.0-10.0)緩沖液中。

2)將酶粉用1mM HCl(或25mM Tris-HCl,pH8.0)溶解,使酶液濃度為1-10mg/ml。

3)按照酶量:目的蛋白=1mg:50mg-1mg:500mg,或者酶量:目的蛋白=10U:1mg-100U:1mg,在pH 7.0-10.0條件下酶切。


● 細胞消化

1)取酶粉,用HBSS平衡液(或其他適宜細胞消化的緩沖液,如需要加入 EDTA 其終濃度推薦0-1mM,最好不超過(guò)2mM),配制為蛋白濃度0.1-0.3mg/ml(或者酶活濃度300U/ml-1000U/ml)的消化液,輕柔混勻。

2)使用 0.22μm 濾膜對上述胰蛋白酶溶液過(guò)濾并轉移至無(wú)菌容器中。

3)該消化液可當天按照要求直接使用(例如加入1ml至T25瓶,37℃消化細胞),也可在2-8℃條件下保存30天。(若需在2-8℃保存更長(cháng)時(shí)間,可購買(mǎi)我公司產(chǎn)品TrypRE select?;蚺c我公司技術(shù)人員聯(lián)系。)


重組胰蛋白酶(1:250)

● 取0.25g重組胰蛋白酶(1:250)粉末,加入100ml HBSS平衡鹽溶液制成0.25%的溶液,在室溫下攪拌溶解約 10min。

● 用磷酸和氫氧化鈉溶液調pH至7.4-7.8之間,用0.22μm膜過(guò)濾,置于-20℃下保存。



# 說(shuō)明:

1、處理難消化細胞,可配制為 0.4-1.0%溶液。

2、HBSS平衡鹽溶液配方:400mg/L KCl,60mg/L KH2PO4,350mg/LNaHCO3,8000mg/LNaCl,121mg/L Na2HPO4·12H2O,1000mg/L葡萄糖



*參考文獻

1.《中國藥典》2020版——重組胰蛋白酶檢測要求公示

2.冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應用[J]. 中國藥學(xué)(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)



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