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    技術支持丨細胞培養和細胞消化操作過程小貼士
    日期:2023-08-21    瀏覽次數:

    細胞是生物學實驗的重要材料,也是生物細胞學實驗的基礎。藥物、基因功能、疾病機理等的相關研究多數需要在細胞水平進行闡釋。在細胞培養和消化的操作過程中,受人員操作和環境條件的影響比較大,因此每個環節都有可能導致操作的失敗。以下是我們匯總了關于細胞培養和細胞消化的小貼士,希望能給正操作細胞培養和細胞消化的研發人員帶來幫助。

     

    細胞系身份需明確

    之所以選定某種細胞系開展實驗,是因為所選細胞系的一些特性符合研究方向的設定。比如組織特性,疾病特性,功能特性,基因表達特性等。一旦用錯了細胞株,對研究結果的判斷就會帶來很大的誤差和不確定性。

    而近年來,多個權威機構發現細胞系在培養和流通過程中,出現了很嚴重的交叉污染。據不完全統計,單就HeLa細胞系導致的污染致使3萬多篇論文結果的準確性存在問題(doi:10.1371/journal.pone.0186281)。而這種情況不僅僅限于HeLa細胞。多個權威機構研究人員檢測發現超過451個細胞系已被其它細胞完全吸收,在所檢測細胞中污染占比46%,可見細胞交叉污染的現象非常普遍。因此,做實驗前對細胞株驗明正身非常重要。如果是在機構購買的細胞株,最好能讓供方提供合格的STR鑒定報告。

    技術支持丨細胞培養和細胞消化操作過程小貼士 

     

    細胞培養和消化

    細胞培養大致分為兩種,一種是懸浮細胞培養,一種是貼壁細胞培養,無論是哪種方式,進行細胞培養時一般會通過以下幾個步驟:

    技術支持丨細胞培養和細胞消化操作過程小貼士

    當然以上只是細胞培養過程的一個基本框架,實際操作可能會因細胞類型、實驗要求和實驗室的標準操作規程而有所不同。

    細胞消化是研發人員在操作細胞培養過程中一個步驟,一般細胞長至80%-90%密度則需要傳代消化,貼壁細胞傳代前,需要把細胞用消化試劑從培養容器表面解離出來,細胞得以分離成單個懸液傳代至含新鮮培養基的新容器內;常見的細胞消化方法有三種:酶消化法、離子螯合法、機械消化法。其中,酶消化法是用得最多的,主要使用胰蛋白酶,一般濃度在0.25-0.5%,消化的時間根據細胞種類、作用溫度等因素而變化。一般來說,0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37℃條件下消化1-5分鐘就足夠了。需要注意的是,Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性,因此不含Ca2+、Mg2+,EDTA的胰酶活性更高最后,可用含血清的培養基終止胰酶消化。